藥品生產(chǎn)企業(yè)清潔驗證常見(jiàn)問(wèn)題探討

數據，以證明按規定方法清潔后的設備，能始終如一的達到預定的清潔標準[1]。也就是說(shuō)，清潔驗證需證明經(jīng)過(guò)清潔程序清潔后，設備上的殘留物(可見(jiàn)的和不可見(jiàn)的，包括前一產(chǎn)品的殘留物或清潔過(guò)程中洗滌劑中的殘留物)達到規定的清潔限度的要求，且不會(huì )對將生產(chǎn)的產(chǎn)品造成交叉污染。由于清潔方法直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量、安全性和有效性。為了確保清潔有效性以及后續產(chǎn)品沒(méi)有帶入超過(guò)可接受標準的污染物，必須對清潔方法進(jìn)行驗證，以保證患者的安全性和產(chǎn)品質(zhì)量和可靠性。清潔驗證是防止產(chǎn)品交叉污染的主要措施，也是藥品生產(chǎn)監管部門(mén)和生產(chǎn)企業(yè)都重點(diǎn)關(guān)注的內容。尤其對于中西藥復方制劑品種來(lái)說(shuō)，成分更為復雜多樣，再加上在生產(chǎn)過(guò)程中大多出現多品種共線(xiàn)的情況，實(shí)際生產(chǎn)中存在一定污染和交叉污染風(fēng)險，可能影響到臨床用藥安全[2]。

筆者對2017~2019 年涉及清潔驗證問(wèn)題缺陷的國家級、省內及境外生產(chǎn)企業(yè)現場(chǎng)檢查做了梳理和分類(lèi)：48 家(次)國家藥品生產(chǎn)企業(yè)現場(chǎng)檢查中的缺陷項目共736 項，其中有關(guān)清潔驗證過(guò)程的問(wèn)題缺陷48 項，約占缺陷項目總數的6.52 %；95 家(次)省級藥品生產(chǎn)企業(yè)現場(chǎng)檢查中的缺陷項目共650 項，其中有關(guān)清潔驗證過(guò)程的問(wèn)題缺陷18 項，約占缺陷項目總數的2.77 %；13 家(次)國外檢查機構對國內藥品生產(chǎn)企業(yè)現場(chǎng)檢查，缺陷項目共133 項，其中有關(guān)清潔驗證過(guò)程的問(wèn)題缺陷7 項，約占缺陷項目總數的5.26 %。

上述清潔驗證方面的缺陷問(wèn)題主要涵蓋最差條件、清潔方法、取樣方法及取樣點(diǎn)、殘留物及分析方法、人員培訓等方面，約分別占清潔驗證缺陷總數12.3 %、30.1 %、12.3 %、23.3 %、4.1 %。以下將進(jìn)行分述，并列舉部分較突出、值得關(guān)注的問(wèn)題與缺陷。

1 最差條件

理論上，每個(gè)品種涉及的不同設備的都應有確認的各自的清潔操作規程。但在藥品生產(chǎn)實(shí)踐中，企業(yè)不可能也不必要耗費人力、物力、財力對所有涉及到的設備逐個(gè)進(jìn)行確認。這就需要企業(yè)根據自身實(shí)際情況，在眾多的條件中通過(guò)風(fēng)險評估選擇并確定最差條件進(jìn)行清潔驗證。最差條件需要考慮的因素有很多，包括：產(chǎn)品或物料的毒性、溶解性、有無(wú)顏色與氣味、生產(chǎn)的批量及批次，設備的容積大小和幾何形狀、表面粗糙程度、材質(zhì)是否容易清潔、是否存在不易清潔的管徑及死角部位、是否存在多品種共線(xiàn)等。清潔驗證最差條件的選擇需要進(jìn)行風(fēng)險評估，最終確定最差條件[3]。

在藥品生產(chǎn)企業(yè)檢查中發(fā)現，個(gè)別企業(yè)在對一些生產(chǎn)控制區域相關(guān)設備清潔規程的制定上，與相關(guān)清潔驗證中的最差條件相去甚遠。如某企業(yè)D 級潔凈區清潔規程(文件編號：*)4.5項下規定設備在同品種換批時(shí)不清潔，4.13.2 項下規定設備在同品種連續生產(chǎn)超過(guò)2 周或同品種換批間隔時(shí)間超過(guò)3 天時(shí)按更換品種的方式進(jìn)行清潔；上述文件的規定缺乏相關(guān)驗證數據支持及依據。又如某企業(yè)化藥片劑與中藥顆粒劑共線(xiàn)，清潔驗證方案(文件編號略)中初步選取阿奇霉素、半夏和胃顆粒作為顆粒劑生產(chǎn)線(xiàn)的清潔驗證參照物，選取安乃近作為片劑生產(chǎn)線(xiàn)的清潔驗證參照物，選取微生物殘留作為其中一項考察指標，最終選取阿奇霉素作為清潔驗證參照物，不能反映化學(xué)藥與中成藥共線(xiàn)生產(chǎn)的清潔風(fēng)險，而清潔驗證報告(文件編號略)中阿奇霉素回收率試驗選取濃度高于線(xiàn)性最高濃度100 倍。某藥品生產(chǎn)企業(yè)軟膏真空乳化攪拌機清潔驗證報告不完整：該設備用于4個(gè)已上市品種、2 個(gè)研究品種的配制，在清潔驗證方案中未對所有使用該設備的品種進(jìn)行風(fēng)險評估并明確最難清潔的品種，僅使用了***軟膏作為清潔驗證的對象，對跟該設備一體的預處理鍋(用于配制該品種的基質(zhì)：白凡士林及其它品種的水相)的清潔未納入驗證報告中。

2 清潔方法

清潔方法包括共線(xiàn)產(chǎn)品更換不同產(chǎn)品清潔方法和相同產(chǎn)品不同批次更換的清潔方法、不同生產(chǎn)設備的清潔方法、清潔方式是在線(xiàn)清潔還是離線(xiàn)清潔、清潔劑的選擇和種類(lèi)、清潔時(shí)間、清潔程序、清潔操作動(dòng)作、清潔劑的濃度、清潔劑更換種類(lèi)的時(shí)間間隔、是否需要預洗和檢查、清洗后是否需要干燥、清潔后的設備或器具的儲存方式及條件、清潔劑是否屬于Ⅰ、Ⅱ類(lèi)溶劑及對環(huán)境造成影響[4]等內容。

在檢查中發(fā)現某企業(yè)清潔操作規程規定了不同車(chē)間潔凈服分開(kāi)清洗的要求，但無(wú)洗衣機專(zhuān)用要求的相關(guān)規定，而且洗完后的潔凈服共用同一車(chē)間的整衣間，企業(yè)未對上述潔凈服清潔環(huán)境與存儲方式可能造成的交叉污染進(jìn)行風(fēng)險評估。又如某企業(yè)《一般生產(chǎn)區容器具清潔、干燥標準操作規程》(文件編號略)規定生產(chǎn)結束用乙醇浸泡生產(chǎn)器具，然后再水洗，但現場(chǎng)動(dòng)態(tài)檢查時(shí)步驟1 工序的操作人員未按規定操作，對浸泡用乙醇任意以水進(jìn)行勾兌。某企業(yè)《凍干粉針車(chē)間灌裝加塞機(灌裝部件)、除菌過(guò)濾系統清潔效果再驗證方案》、《凍干粉針車(chē)間KGS10-X2型抗生素瓶灌裝加塞機清潔、消毒、滅菌操作規程》、《凍干粉針車(chē)間藥液過(guò)濾系統清潔、滅菌標準操作規程》中可拆卸部件清潔程序有兩種清潔方法(常規清潔方法、2 %氫氧化鈉溶液清潔方法)，但驗證報告顯示只驗證了其中一種；2 %氫氧化鈉溶液清潔方法要求“放入2 %氫氧化鈉溶液中浸泡15~30 分鐘”，實(shí)際驗證選擇浸泡時(shí)間為30 分鐘。

3 取樣方法及取樣點(diǎn)

清潔驗證相關(guān)取樣方法包括淋洗取樣法、擦拭取樣法、目視檢查法等。

淋洗取樣法適用于無(wú)法采用擦拭取樣的區域，取樣分析結果可以代表沖洗液中所有被移除的殘留物總和。取樣過(guò)程不會(huì )污染設備、取樣后無(wú)需重新清洗、該方法適用于中藥制劑活性成分、清潔劑、生物負載在線(xiàn)分析。由于該法只能檢測到溶于沖洗溶劑的殘留物，因此必須確保沖洗液接觸到所有表面以充分檢測殘留物。該方法關(guān)鍵之處在于沖洗造成樣品稀釋?zhuān)瑲埩舻姆植嘉恢眯畔⒂邢�，導致無(wú)法檢出。該方法通常僅限于沖洗整個(gè)設備。對舊設備而言，是否有取樣口，或者取樣口是否容易接近都是要考慮的問(wèn)題。

擦拭取樣法常采用纖維材料擦拭表面，將有殘留物的纖維材料置于溶劑中，用經(jīng)過(guò)驗證可行的方法分析溶劑中的殘留物。選擇擦拭棉簽前需要評估棉簽的性質(zhì)，如析出物和脫落物。表面殘留物的回收率還取決于棉簽頭部或擦拭巾的大小和形狀以及把手彈性和長(cháng)度。不同材質(zhì)的回收率試驗在此方案進(jìn)行前必須完成，應由同一個(gè)人至少進(jìn)行三次操作，應大于或等于50 %，三次結果的RSD 應小于等于20 %。為確保產(chǎn)品的安全性，在計算殘留量時(shí)應以最低污染的風(fēng)險，采取回收率最低的材質(zhì)作為最終回收率。

目視檢查法盡管直觀(guān)迅速，能檢查到取樣不易發(fā)現、集中集聚的小面積污染物，可在清潔驗證和日常清潔操作中用于評估和證明效果、評估目視檢查限度與允許殘留限度的關(guān)系，適用于一般清洗結果判定；但由于不能定量，主觀(guān)性強。如某些設備、管道等無(wú)法直接觀(guān)察的表面，需借助光學(xué)設備(如纖維內窺鏡等)或輔助照明設備檢查，故不做單一可接受標準。

制藥生產(chǎn)設備種類(lèi)繁多，各種設備的構造和形狀不盡相同。取樣點(diǎn)的選擇必須具有很強的代表性，取樣點(diǎn)的選擇至關(guān)重要。取樣點(diǎn)的選擇應考慮的風(fēng)險因素包括不限于：接觸的藥物量大、表面粗糙、不光滑的設備區域，清潔劑不易接觸的死角、管徑從小到大變化區域，設備壓力小、流速低區域，易吸附主藥或清潔劑區域等。設備存在微生物殘留的風(fēng)險因素還包括排水口和易積水的區域。取樣點(diǎn)的選擇應在清潔驗證方案中詳細指定、說(shuō)明，并用圖片、圖表和符號標示明確取樣點(diǎn)的實(shí)際位置。取樣點(diǎn)應關(guān)注設備的特殊位置結構，如坡度、光滑程度、拋光程度、圓弧角、結合處、盲管、焊縫或密封接縫，以及下料口、沖頭、灌裝頭、管道等處。上述部位清潔劑流速低或不易到達，易吸附殘留物，一般情況下選擇擦拭取樣[5]。

檢查中發(fā)現一些生產(chǎn)企業(yè)對清潔方式選擇不合理、清潔驗證方案中的取樣計劃未對取樣位置、取樣量和取樣數量進(jìn)行詳細描述，不利于實(shí)際操作，且對取樣點(diǎn)的合理性進(jìn)行分析不足。如某中藥配方顆粒生產(chǎn)企業(yè)固定料斗混合機、篩粉機、振動(dòng)篩清潔規程中，清潔劑均為飲用水且未用純化水進(jìn)行清洗，清潔效果評價(jià)僅為目視檢查；某企業(yè)清潔驗證殘留物擦拭取樣及樣品制備記錄不完整，存在缺少取樣對應生產(chǎn)批次和取樣時(shí)間信息等問(wèn)題；某企業(yè)未對配液罐的清潔前取樣進(jìn)行檢驗；某企業(yè)QXJ-120 型提升式清洗機再驗證報告(文件號：*)制定不詳盡中，未明確所使用到的料斗型號和清潔驗證取樣點(diǎn)；某過(guò)篩間的一個(gè)地漏有部分位于地面圓弧地角下，不方便清潔及取樣；某企業(yè)清潔驗證報告(編號：YZ07-013b-2)中阿奇霉素回收率試驗選取濃度高于線(xiàn)性最高濃度100 倍；某企業(yè)個(gè)別設備清潔驗證方案設計不合理，如：用于肝素芐索氯銨鹽真空干燥托盤(pán)的清潔驗證方案中規定只用目視檢查，未取樣做活性殘留檢測。

4 殘留物及分析方法

在藥品實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中，清潔后的場(chǎng)地和設備可能存在多種殘留物，如活性成分(原料藥主成分)、輔料、溶劑、降解產(chǎn)物、清潔劑、溶劑、消毒劑、微生物、細菌內毒素、物理微粒等。在實(shí)際清潔驗證過(guò)程中，往往根據使用相近設備組合的產(chǎn)品進(jìn)行分類(lèi)。同一類(lèi)別的設備組合中選擇毒性最強或者最難清潔的殘留物作為參照物質(zhì)，并以此作為清潔驗證中要清潔的目標，其限度作為清潔驗證程度的重要指標。

藥品生產(chǎn)企業(yè)應根據產(chǎn)品的特性選擇合適的檢測方法，真實(shí)反映清潔效果。清潔驗證的方法驗證應按照《中國藥典》附錄9101 的規定參照“雜質(zhì)測定”定量或限度的方法進(jìn)行驗證，涵蓋準確性、精密度、專(zhuān)屬性、線(xiàn)性和范圍，及定量限、檢測限等內容。涉及到藥典方法如細菌內毒素、微生物限度檢驗方法，需要確認方法適用性，不需要進(jìn)行方法學(xué)驗證。

清潔驗證過(guò)程中涉及的所有設備的儀器儀表必須進(jìn)行校準，確保獲得數據參數的準確性。相關(guān)分析方法的選取應考慮被檢測物質(zhì)的性質(zhì)、及方法本身的靈敏度是否滿(mǎn)足檢測出限度范圍內的殘留物或污染物。常用清潔驗證分析方法有高效液相色譜法(HPLC)、薄層色譜法(TLC)、分光光度法(UV)、總有機碳(TOC)檢測法、電泳分析法、pH 值和電導率檢測法等。高效液相色譜法(HPLC)具有專(zhuān)屬性高、靈敏度高、檢出限低等特點(diǎn)。對于組分明確、純度高的品種來(lái)說(shuō)，基本能反映清潔效果。但檢測所用設備、對照品等成本較為昂貴，可能分析時(shí)間相對較長(cháng)。薄層色譜法(TLC)具有專(zhuān)屬性高、靈敏度高、可定量的優(yōu)點(diǎn)。但終點(diǎn)目視無(wú)法定量，且樣品制備時(shí)間相對較長(cháng)。分光光度法(UV)專(zhuān)屬性較高，靈敏度高；但無(wú)法定量檢測�？傆袡C碳(TOC)檢測法可在線(xiàn)監測測定包括水溶性物質(zhì)在內的有機物殘留，樣品可快速周轉，在中藥制劑清潔驗證中較常用[6]；但僅適用水溶性樣品，且專(zhuān)屬性較差。電泳分析法對生物藥品有專(zhuān)屬性，檢測靈敏度高；但存在檢測成本昂貴、不能處理變性蛋白質(zhì)、樣品周轉時(shí)間長(cháng)的不足。pH 和電導率檢測法常用于在線(xiàn)清洗系統的清洗終點(diǎn)判斷，優(yōu)點(diǎn)是可快速測定和在線(xiàn)監測，經(jīng)濟方便且應用廣泛；但僅適用水溶性樣品，專(zhuān)屬性較差。

部分生產(chǎn)企業(yè)清潔驗證工作中的殘留物檢測用樣品處理方式、分析方法選擇上存在一定問(wèn)題，如某企業(yè)《F 線(xiàn)在線(xiàn)清洗、滅菌效果再驗證方案》未對殘留量的分析方法進(jìn)行確認；某企業(yè)清潔殘留限檢測方法采用《清潔驗證中***殘留分析方法驗證報告和不同材質(zhì)上的回收率研究》(文件編號：*)中樣品處理方法為“棉簽加入10 mL 水中，超聲處理10 min”，與擦拭樣品檢驗原始記錄中樣品處理方法不一致；某企業(yè)殘留檢驗項目不合理(如僅對清潔劑殘留進(jìn)行檢測、僅進(jìn)行目視殘留檢測、設備堿液浸泡清洗后不測試pH 值等)，具體限度數值(如紫外吸光度小于特定數值等)制定依據不充分，未按驗證方案規定項目進(jìn)行全項檢測等。

5 人員培訓

從事相關(guān)清潔驗證的人員的組成和組織情況是確保清潔驗證有效實(shí)施的首要條件。對于參與清潔驗證的相關(guān)人員，特別是與清潔驗證相關(guān)設備清潔的操作人員，必須對相關(guān)的清潔操作規程進(jìn)行嚴格培訓。取樣操作人員應是企業(yè)的QA 或QC 人員，要求接受過(guò)清潔驗證方案培訓，熟悉取樣位置和取樣方法，能解釋取樣過(guò)程中的要求和程序的基本原理，應定期再培訓和并通過(guò)考核。絕大多數企業(yè)在清潔驗證工作人員組建和培訓方面較為重視，但一些企業(yè)在對從事相關(guān)清潔驗證的人員的培訓內容不夠全面和細致，如某企業(yè)取用于測TOC 樣品的操作人員不熟悉在取樣前應避免使用乙醇消毒手套，以免對樣品造成的污染的相關(guān)知識；某企業(yè)對執行取樣方法驗證中的棉簽擦拭操作的人員的培訓內容未見(jiàn)回收率實(shí)驗考核。

6 結語(yǔ)

開(kāi)展有效的清潔驗證工作是降低藥品生產(chǎn)過(guò)程中污染、交叉污染以及混淆、差錯等風(fēng)險的一項重要舉措。根據風(fēng)險評估結果來(lái)確定清潔驗證方法可進(jìn)一步保障藥品生產(chǎn)質(zhì)量，并在此基礎上提高清潔驗證效率，減少清潔驗證工作量，進(jìn)一步降低成本、提升企業(yè)生產(chǎn)效率。同時(shí)，藥品檢查員在各類(lèi)藥品生產(chǎn)企業(yè)檢查過(guò)程中，也應基于風(fēng)險對清潔驗證的有關(guān)內容開(kāi)展有針對性的檢查，進(jìn)一步提升現場(chǎng)檢查工作質(zhì)量。